Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身病原锥体到显现1改进型哮喘临床病因的成果百余人在儿童末期就有很好的阐述，多个胰脏自身病原锥体感染性的儿童中的有70%在血清反转后10年内罹患哮喘，而随访15年的儿童这一比例增高到84%。相比之下，占临床1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的确诊机制还没有得不到充分的科学研究。

日益多的人开始采用分期系统来假设1改进型哮喘的成果：个锥体在显现多种胰脏自身病原锥体时转到第1阶段，显现血糖异常时转到第2阶段，显现病因时转到第3阶段。一些多发胰脏自身病原锥体感染性的个锥体，在1期和2期，成果较更慢，并的发展为确诊的1改进型哮喘。我们之前阐述了一三组在首次验证到多种胰脏自身病原锥体取样后仅仅10年无哮喘的极更慢成果者，这三组高血压人数少，但不同之处非常一致。随后，我们见到胰脏自身特异性特异性CD8+T细胞核反不应在成果快速的高血压中的理论上不存在，但在近期确诊和依然存在的哮喘高血压中的很容易验证到。这可能会表明，与成果高血压相比，这些高血压自身免疫反不应的平衡增强。

早期科学研究表明，尽管平衡性T细胞核(Treg)使用量出现异常，但哮喘高血压存在一些功用有缺陷，其中的包括对IL-2的反不应能力减小。此外，哮喘高血压中的的效不应CD4+T细胞核可能会对平衡更具抵抗性，表现为效不应T细胞核的减缓减弱，纯净产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞核中的IL-2反不应减弱。本科学研究的目的是阐述了CD4+平衡性T细胞核(Treg)在领头极快速成果者中的的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群依此的纵向科学研究，在21岁表列确诊的高血压亲属中的检查1改进型哮喘的危险因素。我们之前阐述了依然快速成果者的不同之处，他们保持多重胰脏自身病原锥体感染性有约10年，但没有显现哮喘的临床病因，更慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量体液取样的快速成果者确立T和B细胞核功用分析。在目前的科学研究中的，8名更慢成果者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的胰脏自身病原锥体感染性。所有的组织者都处于1改进型哮喘成果的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身病原锥体对某些特异性的感染性反不应，然而，一名高血压已经处于2期仅仅6年，但没有显现临床病因，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验室取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该供锥体来进行了单独审计。剥离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核练成和T细胞核减缓试验审计供锥体中的Treg的频百余人、表改进型和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)来进行无统筹聚类分析，审计Treg表改进型。

结果：与卫生供锥体相比，来自更慢成果锥体的思绪CD4+T细胞核的统筹聚类揭示，介导的思绪CD4+ Treg频百余人增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)强调增高有关。一名HbA1c升高的高血压与成果快速者和归一化的对照三组相比，Treg谱有所区别。功用分析表明，与卫生供锥体相比，来自快速成果锥体的Treg介导的CD4+效不应T细胞核减缓明显损坏。表现为对效不应CD4+T细胞核CD25和CD134强调的减缓增高。

平面图1 险恶的表改进型分析揭示，CD4+Treg亚改进型在更慢成果函数调用中的增高。由FlowSOM生成的Treg过道，汇聚在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据记号物强调确认出10个元簇:思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个结点亦然一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在结点三组远处打磨。每个结点中的的饼平面图对此单个记号的强调级别。(b)每个元聚类的热平面图，以揭示整锥体记号强调。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)一般来说轻元素为每个metacluster箱线平面图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核(l)。绿色白点亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 采用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频百余人的增高是成果快速的红色。分级奈斯(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP组织者和归一化的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的传奇色彩平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调来进行剥离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(白斑)和SP(黑纹)三组以及供锥体SP 606(绿色)中的CD25+ cd127的频百余人综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯姪集的箱线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)木瓜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调高强度制做，箭头凸显的簇被识别为SP和HD函数调用密切关系的不同。(j)箱线平面图揭示了在SP(黑纹)和HD(灰点)三组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说轻元素(比例)。(k)直方平面图揭示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg记号一般来说强调与时代背景强调(红色);上列，内核Treg_3;下面偷偷地，内核Treg_4。时代背景与所有其他簇中的记号的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与卫生献血者相比，成果快速者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T细胞核元簇(思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调记号的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的强调热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR强调串联，揭示直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有供锥体包括，p< 0.05(红色)供锥体SP 606和归一化的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)串联，揭示直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自快速成果的CD4+ treg细胞核依靠效不应CD4+T细胞核的能力减小。SP三组用红色的线和白点对此，HD三组用黑色的线和白点对此，绿色的线/白点对此供锥体sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(不这样的话者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的比例溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培养出来3天内来进行流式细胞核练成验证。(a-d)与CD4+不这样的话者一般来说不应的treg培养出来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不这样的话者培养出来。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE减缓比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比例。采用感染性对照(介导的响不应细胞核不含treg)近似值减缓比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效不应CD4+T细胞核对快速成果的T细胞核再造的减缓更敏感。SP三组用红色的线和白点对此，HD三组用黑色的线和白点对此，绿色的线/白点对此供锥体sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(不这样的话者)被cfsel记号，treg按捕捉到的比例溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培养出来3天内来进行流式细胞核练成(CD25反染)和细胞核因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606不这样的话者共同培养出来。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE减缓百分百余人(b)。(c,d) CD25减缓百分百余人(c)和CD134减缓百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们推断的论据是，来自快速成果姪的再造思绪CD4+Treg在GITR强调中的得不到了延展和丰富，合理化了更进一步科学研究Treg在1改进型哮喘可能会个锥体中的的异质性的更更进一步。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28