Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型高血压患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现口内自身HIV到显现1标准型哮喘病理症状的方面率在孩童初期就有很好的揭示，多个口内自身HIVHIV的孩童里面有70%在肝脏反转后10年末身患哮喘，而随访15年的孩童这一比例减少到84%。相比之下，占总病理1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的患病机制还很难得到确实的研究者。

越来越多的人开始采用分阶段性系统来并不一定1标准型哮喘的方面：个体在显现多种口内自身HIV时踏入第1阶段性，显现血糖精神状态时踏入第2阶段性，显现症状时踏入第3阶段性。一些多发口内自身HIVHIV的个体，在1期和2期，方面更较慢，并的发展为患病的1标准型哮喘。我们之前揭示了一三组在首次验证到多种口内自身HIV样本后至少10年无哮喘的极较慢方面者，这三组病患者总人数少，但特征非常明确。随后，我们发现口内自身HIVHIVCD8+T肝细胞自由基在方面很较慢的病患者里面基本不长期存在，但在近期患病和与此相关的哮喘病患者里面很较难验证到。这可能暗示，与方面病患者相比，这些病患者诱发自由基的缓冲大幅提高。

早期研究者暗示，尽管缓冲性T肝细胞(Treg)数量正常，但哮喘病患者长期存在一些功能瑕疵，其里面都有对IL-2的自由基灵光阴性降低。此外，哮喘病患者里面的震荡CD4+T肝细胞可能对缓冲更为具抵抗性，体现为震荡T肝细胞的选择性弱化，自然归因于的Treg和排泄归因于的诱导Treg，以及HIV境况的CD4+T肝细胞里面IL-2自由基弱化。本研究者的目的是揭示了CD4+缓冲性T肝细胞(Treg)在一小群极很较慢方面者里面的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以老年人依此的纵向研究者，在21岁以下确诊的病患者亲属里面检查和1标准型哮喘的危险因素。我们之前揭示了长小时很较慢方面者的特征，他们保持稳定多重口内自身HIVHIV超过10年，但很难显现哮喘的病理症状，较慢性或非来进行性诱发。随后，10名继续保持稳定无哮喘并愿意提供大量血液样本的很较慢方面者确立T和B肝细胞功能分析。在在此之前的研究者里面，8名较慢方面者(SP三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身HIVHIV。所有的自发性都始终保持1标准型哮喘方面的1期，尽管一些人随后失去了口内自身HIV对某些HIV的HIV自由基，然而，一名病患者已经始终保持2期至少6年，但很难显现病理症状，一名病患者被病患为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在研究小组里面对该NADPH来进行了单独评核。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞妖术和T肝细胞选择性实验评核NADPH里面Treg的频带、表标准型和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)来进行无指派聚类分析，评核Treg表标准型。

结果：与健康NADPH相比，来自较慢方面体的遗忘CD4+T肝细胞的指派聚类说明了，激光阴的遗忘CD4+ Treg频带减少，与止痛药诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减少有关。一名HbA1c增大的病患者与方面很较慢者和匹配的对照三组相比，Treg序有所多种不同。功能最近，与健康NADPH相比，来自很较慢方面体的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞选择性显着损伤。体现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134隐含的选择性减少。

由此可知1 透彻的表标准型分析说明了，CD4+Treg亚标准型在较慢方面函数调用里面减少。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物隐含鉴定出10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)采用9个多种不同Treg标明分解成的10个元簇的MST。每个数据流均是由一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更为大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流三组周围装裱。每个数据流里面的面包由此可知问到单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了整体标明隐含。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)分解成由此可知，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下丰度为每个metacluster箱内本站由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。橙色格子均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一三组字母秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 采用CITRUS的预测模标准型猜测，Treg频带的减少是方面很较慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)更为为SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的均是由性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含来进行分离，虚拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)三组以及NADPHSP 606(橙色)里面CD25+ cd127的频带汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的箱内本站由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含准确度可视，箭头突出的簇被辨识为SP和HD函数调用之间的多种不同。(j)箱内本站由此可知说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)三组里面，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比之下丰度(比例)。(k)直方由此可知说明了每个簇的表标准型(紫色)和Treg标明相比之下隐含与或多或少隐含(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;示意图一行，寄存器Treg_4。或多或少与所有其他簇里面标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一三组字母秩检验

由此可知3 与健康献血者相比，方面很较慢者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个隐含标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR隐含串联，说明了直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon一三组字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NADPH都有，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不都有在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，说明了直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon一三组字母秩检验

由此可知4 来自很较慢方面的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的灵光阴性降低。SP三组用浅蓝色的本站和格子问到，HD三组用粉红色的本站和格子问到，橙色的本站/格子问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按仔细观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化肝细胞，人才培养3翌日来进行流式肝细胞妖术验证。(a-d)与CD4+反之亦然者相比之下应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。采用HIV对照(激光阴的响应肝细胞不含treg)计算出来选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为为测试

由此可知5 震荡CD4+T肝细胞对很较慢方面的T肝细胞光阴化的选择性更为敏感。SP三组用浅蓝色的本站和格子问到，HD三组用粉红色的本站和格子问到，橙色的本站/格子问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按仔细观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化肝细胞，人才培养3翌日来进行流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝诱导分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同完成人才培养。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE选择性三份(b)。(c,d) CD25选择性三份(c)和CD134选择性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为为测试

推论：我们得出的推论是，来自很较慢方面子的光阴化遗忘CD4+Treg在GITR隐含里面得到了延展和多样化，强调了进一步研究者Treg在1标准型哮喘安全性个体里面的差异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28