Diabetologia：激活但功能受损的梦境Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现家兔自身抗本体到经常出现1型式哮喘临床病因的方面率在老年人初期就有很好的揭示，多个家兔自身抗本体之中性的老年人之除此以外70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的老年人这一%增加到84%。相比之下，占到临床1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的发作机制还没有人受益充分的深入研究。

越来越多的人开始用于有系统该系统来假定1型式哮喘的方面：个本体在经常出现多种家兔自身抗本体时进到第1下一阶段，经常出现浓度异常时进到第2下一阶段，经常出现病因时进到第3下一阶段。一些多发家兔自身抗本体之中性的个本体，在1期和2期，方面较慢，并发展为发作的1型式哮喘。我们之前揭示了一举例来说在首次检验到多种家兔自身抗本体样本后至少10年无哮喘的正因如此慢方面者，这举例来说病人人数少，但形态相当明确。随后，我们发现家兔自身蛋白质甲基化CD8+T细胞反应将器底物在方面较慢的病人之中基本不不存在，但在最近发作和长期不存在的哮喘病人之中很容易检验到。这可能表明，与方面病人相比，这些病人免疫性底物的适度增强。

以前深入研究表明，尽管适度性T细胞反应将器(Treg)数量出现异常，但哮喘病人不存在一些基本功能缺陷，其之中之外对IL-2的底物能力降低。此外，哮喘病人之中的effectCD4+T细胞反应将器可能对适度凸显抵抗性，平庸为effectT细胞反应将器的依赖性减弱，自然产生的Treg和本体外产生的诱发Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞反应将器之中IL-2底物减弱。本深入研究的目的是揭示了CD4+适度性T细胞反应将器(Treg)在一个大正因如此较慢方面者之中的形态，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群系统化的两端深入研究，在21岁以下确诊的病人亲属之中保健检查1型式哮喘的危险因素。我们之前揭示了长期较慢方面者的形态，他们保持多重家兔自身抗本体之中性超过10年，但没有人经常出现哮喘的临床病因，慢性或非顺利完成性免疫性。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量肝脏样本的较慢方面者纳入T和B细胞反应将器基本功能深入深入研究。在现下一阶段的深入研究之中，8名慢方面者(SP举例来说)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗本体之中性。所有的参与者都处于1型式哮喘方面的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗本体对某些蛋白质的之中性底物，然而，一名病人早已处于2期至少6年，但没有人经常出现临床病因，一名病人被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据深入深入研究之中对该供本体顺利完成了原则上指标。转化外周血单个反应将器细胞反应将器(PBMCs)，使用多参数流式细胞反应将器练成和T细胞反应将器依赖性试验指标供本体之中Treg的频率、基因型式和基本功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无督导聚类深入深入研究，指标Treg基因型式。

结果：与保健供本体相比，来自慢方面本体的思绪CD4+T细胞反应将器的督导聚类说明了，激活的思绪CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)表示增加有关。一名HbA1c消退的病人与方面较慢者和最简单的解读举例来说相比，Treg谱相同。基本功能深入深入研究表明，与保健供本体相比，来自较慢方面本体的Treg介导的CD4+effectT细胞反应将器依赖性明显受损。平庸为对effectCD4+T细胞反应将器CD25和CD134表示的依赖性增加。

绘出1 深入的基因型式深入深入研究说明了，CD4+Treg甲型式在慢方面缓冲区之中增加。由FlowSOM生成的Treg室，区域内在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -细胞反应将器上。根据记号物表示鉴定出10个元簇:思绪T细胞反应将器_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞反应将器;HLA-DR + GITR +思绪T细胞反应将器;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在键值举例来说区域内上色。每个键值之中的饼绘出透露单个记号的表示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整本体记号表示。(c, d)为HD举例来说(c)和SP举例来说(d)生成绘出，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下稀土元素为每个metacluster罐终点站绘出(稀土元素> 0.05%)考虑到为HD和SP举例来说:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞反应将器(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞反应将器(l)。深浅蓝色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用于CITRUS的预测模型式证实，Treg频率的增加是方面较慢的标志。分级介导(a - f)和橄榄深入深入研究(g-k)尤其SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞反应将器上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示顺利完成转化，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(网纹)和SP(黑斑)举例来说以及供本体SP 606(深浅蓝色)之中CD25+ cd127的频率汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导偏序的罐终点站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)玉米簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示气压着色，圆圈突出的簇被识别系统为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)罐终点站绘出说明了了在SP(黑斑)和HD(灰点)举例来说之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比之下稀土元素(%)。(k)直方绘出说明了每个簇的基因型式(暗红色)和Treg记号相比之下表示与背景表示(浅蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇之中记号的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

绘出3 与保健献血者相比，方面较慢者思绪treg的GITR增加。每个思绪CD4+T细胞反应将器元簇(思绪T细胞反应将器_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞反应将器;HLA-DR + GITR +思绪T细胞反应将器;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表示热绘出(sp606不之外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)的FlowSOM GITR表示接在，说明了直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(深浅蓝色)所有供本体之外，p< 0.05(浅蓝色)供本体SP 606和最简单的HD不之外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表示，从分级介导，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)接在，说明了直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

绘出4 来自较慢方面的CD4+ treg细胞反应将器控制effectCD4+T细胞反应将器的能力降低。SP举例来说用浅蓝色的终点站和格子透露，HD举例来说用黑色的终点站和格子透露，深浅蓝色的终点站/格子透露供本体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞反应将器顺利完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被记号为CFSE, Treg按注意到的%指示剂。用抗CD3 /28微珠诱导细胞反应将器，人才3几天后顺利完成流式细胞反应将器练成检验。(a-d)与CD4+应将答者相比之下应将的treg人才(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。用于之中性解读(激活的响应将细胞反应将器不含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

绘出5 effectCD4+T细胞反应将器对较慢方面的T细胞反应将器诱导的依赖性更敏感。SP举例来说用浅蓝色的终点站和格子透露，HD举例来说用黑色的终点站和格子透露，深浅蓝色的终点站/格子透露供本体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞反应将器顺利完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel记号，treg按注意到的%指示剂。用抗CD3 /28微珠诱导细胞反应将器，人才3几天后顺利完成流式细胞反应将器练成(CD25反染)和细胞反应将器因子深入深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

结论：我们得出结论的结论是，来自较慢方面子的诱导思绪CD4+Treg在GITR表示之中受益了扩展和比较丰富，强调了大幅度深入研究Treg在1型式哮喘风险个本体之中的表型的必要。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28