Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中会逐渐扩展

从第一次显现家兔自身抗躯到显现1型式肝炎临床研究征状的十分困难率在婴幼儿时期就有很好的揭示，多个家兔自身抗躯感染性的婴幼儿在此之后有70%在血液反转后10年内患上肝炎，而随访15年的婴幼儿这一比例提高到84%。比起之下，占临床研究1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的确诊程序还没有得到适当的研究者。

越来越多的人开始用作分期控制系统来定义1型式肝炎的十分困难：幼躯在显现多种家兔自身抗躯时重回第1阶段性，显现血糖间歇性时重回第2阶段性，显现征状时重回第3阶段性。一些多发家兔自身抗躯感染性的幼躯，在1期和2期，十分困难较迟，并拓展为确诊的1型式肝炎。我们在此之后揭示了一小组在首次检测到多种家兔自身抗躯试样后至少10年无肝炎的近乎迟十分困难者，这小组病人人数少，但外观上比较指明。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T细胞内反理应在十分困难较快的病人在此之后基本不存在，但在近期确诊和长时间存在的肝炎病人在此之后很容易检测到。这意味著断定，与十分困难病人比起，这些病人自身免疫反理应的闭环增强。

后期研究者断定，尽管闭环性T细胞内(Treg)数目正常，但肝炎病人存在一些功用弱点，其在此之后还包括对IL-2的反理应潜能减低。此外，肝炎病人在此之后的效理应CD4+T细胞内意味著对闭环更具抵抗性，躯现为效理应T细胞内的消除消散，其本质转化成的Treg和躯外转化成的抑制Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内在此之后IL-2反理应消散。本研究者的最终目标是揭示了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在在在近乎较快十分困难者在此之后的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁一般而言确诊的病人亲戚在此之后定期检查1型式肝炎的有意味著主因。我们在此之后揭示了长时间较快十分困难者的外观上，他们保持多重家兔自身抗躯感染性大约10年，但没有显现肝炎的临床研究征状，迟性或非性功用自身免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量血液试样的较快十分困难者纳入T和B细胞内功用数据分析。在以外的研究者在此之后，8名迟十分困难者(SP小组)，在此之后位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗躯感染性。所有的参与者都处于1型式肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗躯对某些抗原的感染性反理应，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但没有显现临床研究征状，一名病人被诊断为肝炎，该受测者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析在此之后对该ADP进行了单独评估。除去外周血单个核细胞内(PBMCs)，引入多参数流式细胞内忍术和T细胞内消除试验评估ADP在此之后Treg的频著者、躯现型式和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)进行无指导聚类数据分析，评估Treg躯现型式。

结果：与生活品质ADP比起，来自迟十分困难躯的无意识CD4+T细胞内的指导聚类断定，激活的无意识CD4+ Treg频著者提高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)隐含提高有关。一名HbA1c急剧下降的病人与十分困难较快者和最简单的对应小组比起，Treg著者有所不同。功用数据分析断定，与生活品质ADP比起，来自较快十分困难躯的Treg内源性的CD4+效理应T细胞内消除明显受损。躯现为对效理应CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的消除提高。

左图1 熟悉的躯现型式数据分析断定，CD4+TregHIV-式在迟十分困难缓冲区在此之后提高。由FlowSOM聚合的Treg过道，涌进在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物隐含认定出10个元簇:无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不同Treg标有聚合的10个元簇的MST。每个路由推选一个协同(100个协同)，相当大的元协同(10个元协同)在路由小组周边手绘。每个路由在此之后的饼左图回应单个标有的隐含高级别。(b)每个元聚类的热左图，以断定整躯标有隐含。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)聚合左图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster装有本站左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内(l)。深红色红色推选捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用作CITRUS的预测模型式猜测，Treg频著者的提高是十分困难较快的标志。基准奈斯(a - f)和柑橘数据分析(g-k)尤其SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的权威性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含进行除去，三维FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及ADPSP 606(深红色)在此之后CD25+ cd127的频著者核心内容左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的装有本站左图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含数值着色，箭头凸显的簇被辨认为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)装有本站左图断定了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组在此之后，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对丰度(比例)。(k)直方左图断定每个簇的躯现型式(粉红色)和Treg标有相对隐含与故事情节隐含(红色);上列，寄存器Treg_3;示意图一行，寄存器Treg_4。故事情节与所有其他簇在此之后标有的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

左图3 与生活品质献血者比起，十分困难较快者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T细胞内元簇(无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标有的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的隐含热左图(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇在此之后所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)的FlowSOM GITR隐含串联，断定直方左图(c)和核心内容左图(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(深红色)所有ADP还包括，p< 0.05(红色)ADPSP 606和最简单的HD不还包括在测试在此之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs在此之后GITR隐含，从基准奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)串联，断定直方左图(e)和核心内容左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

左图4 来自较快十分困难的CD4+ treg细胞内控制效理应CD4+T细胞内的潜能减低。SP小组用红色的本站和红色回应，HD小组用黑色的本站和红色回应，深红色的本站/红色回应ADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按捕捉到的比例校准。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，养成3过后进行流式细胞内忍术检测。(a-d)与CD4+此番者相对理应的treg养成(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。用作感染性对应(激活的作出反理应细胞内则有treg)计算消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

左图5 效理应CD4+T细胞内对较快十分困难的T细胞内增殖的消除更敏感。SP小组用红色的本站和红色回应，HD小组用黑色的本站和红色回应，深红色的本站/红色回应ADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按捕捉到的比例校准。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，养成3过后进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成在此之后的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论断：我们得出的论断是，来自较快十分困难子的增殖无意识CD4+Treg在GITR隐含在此之后得到了扩展和丰富，强调了实质性研究者Treg在1型式肝炎几率幼躯在此之后的异质性的前提。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28